PCR диагностика - анализът на инфекция

Полимеразна верижна реакция (PCR) - точност молекулно генетична диагностика, което позволява на човек да определи различни инфекциозни и наследствени заболявания, остри и хронични етапи и добре преди заболяването може да се прояви.

Полимеразна верижна реакция (PCR) в 1983 разработи Myullis Cary (САЩ), за които през 1993 г. той получава Нобелова награда за химия.

PCR анализ за повечето инфекции се превърне в нещо като "златен стандарт". Повечето специалисти сблъскват с него почти всеки ден и не са без окончателна диагноза. PCR често е единствената реакция за откриване на активните фази на заболяването в моментите, когато другите не успяват бактериологични, вирусологични и имунологични диагностични методи.

Предимствата на PCR диагностика в съвременната медицина:

• Директен откриване на присъствието на патоген (например, негова специфична част на ДНК или РНК на патогена) в пробата.
• Високата специфичност позволява да се определи уникален участък от ДНК или РНК, характерна за специфичен патоген, която елиминира възможността за фалшиви положителни резултати.
• високата чувствителност на метода PCR може да открие дори единични клетки от патогени (вируси, бактерии). Чувствителността на PCR е 10-1000 в клетката на пробата (например, чувствителност на имунологичните тестове и микроскопични - само 103-105 клетки).
• Разработване на универсална PCR техники за откриване на различни патогени. Предмет на изследване за PCR е генетичен материал (ДНК, РНК) на патогена. Методът позволява да се определят няколко патогени от биологична проба.
• дават резултати достатъчно бързо анализ. А пълно разследване се извършва в продължение на 4-4.5 часа, най-малко - малко по-дълго.
• Възможност за откриване на патогени на симптомите на заболяването (предклинични диагностика) и след това предавани болести (ретроспективен диагноза). Пример за предклинично диагноза ще бъдат разгледани в инкубационния период (от времето на инфекция до появата на оплаквания на пациента), както и на латентна инфекция (когато няма симптоми на всички, но само лабораторни данни - PCR, например). Един от основните моменти на PCR диагностика провежда PCR в архивен материал или биологични остатъци, което е важно за идентифициране или бащинство.

Понастоящем PCR диагностика претърпява значително развитие. Отивате подобряване на начина, времето и отново има нови разновидности на PCR, медицинския пазар получава нова система тест за тази реакция. По този начин цената на анализа е да станат по-достъпни за широк кръг от пациенти всяка година.

Какво е в основата на PCR метод

Основата за полимеразна верижна реакция се повтаря удвояване (усилване) на определена част от ДНК или РНК с помощта на ензими в витро. Резултатът е количеството на ДНК или РНК достатъчно за визуален анализ. Проучването се копира само частта, която отговаря на посочените условия, и то само в ситуация на присъствието му в пробата за анализ.

Например, материалът за изследване, предполага, че съдържа фрагменти ДНК или РНК на патогена (слюнка, кръв, урина, генитално освобождаване) се поставя в специален реактор (термоцикльор). Освен това към него се добавят специфични ензими, които се свързват патоген ДНК или РНК и синтез на негово копие. Той идва на няколко етапа от тип "верижна реакция", а в края на едно копие на генетичния материал може да се формира и стотици хиляди копия. След това идва анализ и сравнение на резултатите с наличната база данни за структурата на различни патогени. Чрез PCR е възможно не само да се определи вида на патогени, но също така и за да се получи количествен резултат от анализа, който е колко патогени в човешкото тяло.

PCR в момента се разширява кръга на възможностите за научни изследвания при въвеждането на мутации, снаждане на ДНК фрагменти, и широко се използва в медицината, например, за да се установи бащинство, появата на нови гени и така нататък.

Какво инфекция може да бъде открит чрез PCR диагностика

1) HIV инфекция (може да открива човешки имунодефицитен вирус HIV-1)
2) вирусен хепатит А, В, С, G (РНК-HAV, HBV ДНК, РНК-HCV, РНК-HGV)
3) инфекциозна мононуклеоза (Epstein-Barr ДНК -VEB)
4) цитомегаловирус (ДНК-CMV)
5) Херпес инфекция (херпес симплекс вирус ДНК на HSV тип 1 и 2)
6) STI (полово предавани инфекции с) - ureaplasmosis, бактериална вагиноза, хламидия, микоплазмоза, трихомониаза,
7) туберкулоза (Mycobacterium туберкулоза)
8) онкогенни вируси - папилома вирус инфекция (човешки папиломен вирус (включително неговите онкогенни видове 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58, и 59)
9) Borreliosis, кърлежи енцефалит
10) листериоза
11) Candida (гъбички от рода Candida)
12) Helicobacter инфекции (Helicobacter Pylori)
и други

Предвид обхвата на патогени, PCR диагностика се използват широко в гинекологични, урологични практика, практика, инфекциозни заболявания, пулмология, туберкулоза, Gastroenterology, хематология, онкологията и др.

Материал за изследване и правилата на неговата ограда

Материалът за PCR анализ, който може да идентифицира чуждата ДНК от бактерия или ДНК или РНК вирус може да служи различна биологична среда и човешки течности: слуз, урина, кръв, слюнка, остъргване епителни клетки, тъкани, плацента, кръв, сок простатата, околоплодна течност, плеврална течност.

При извършване на проверка за полово предавани инфекции (ППИ) сред мъжете и жените са взети от половите органи, клеветническа или изстържете от цитонамазка и драскате от уретрата (пикочния канал), урина.

Когато скрининг за инфекция (херпес инфекция, CMV инфекция, мононуклеоза, токсоплазмоза, хепатит В и С, HIV) PCR оттегли кръв.

За диагностика на инфекциозна мононуклеоза, цитомегаловирус инфекция, е взето херпес инфекция в гърлото тампон за скрининг за CMV - урина. Често, за проучване на щетите нервна система в редица проучвания, предприети гръбначно-мозъчната течност.

В пулмология материал е храчки, плеврална течност.

Когато скрининг за фетални инфекции - околоплодна течност, плацента тъкан.

Подготовка за доставяне на материал и извършване на PCR диагностика

Почти всички пациенти, подложени на PCR диагностика, може да разчита на надеждни, точни и бързи резултати, което зависи до голяма степен от възможността за лабораторията, професионални лабораторни лекари. В същото време, много от тях не осъзнават, че най-надеждните в голяма степен зависи от самите нас, а именно, на препоръките на лекуващия лекар, начин на живот, както и на верността на ограда материал. Когато ограда материали необходими условия без замърсяване (замърсяване) на материала и следователно съмнение обективността на анализа.

Правилната подготовка за доставка на материала не представлява някакви трудности. Следващите препоръки лекарите за пациентите:

1) да нямат полов акт в деня преди датата materiala-
2) кръв за изследвания разглеждат сутрин на празен стомах (не се яде, пие) -
3) По време на първата сутрин урината става част в чист стерилен контейнер.

Дати готовност PCR

Крайният резултат е готов 1,5-2 дни след доставката на материала. В някои случаи, резултатът е готов за първия ден.

Дешифрирането на PCR резултатите

отрицателен PCR резултат показва, че изпитваният материал в момента на доставката не намерихме следи от инфекциозните агенти. Повечето от случаите показва липса на инфекция, която се опитва да намери в пробата за анализ.

положителен PCR резултат показва откриване на следи от инфекция в биологичната проба за изпитване. С голяма точност положителен резултат показва наличието на инфекция в даден момент.

Има ситуации, когато PCR е положителен, но на активна инфекция не може да се говори - така наречените "здравословни превозвач" без клинични симптоми на болестта, която не се нуждае от лечение, но изисква динамично наблюдение от лекар. Той се среща по-често в редица вирусни инфекции (HPV, CMV, EBV инфекция, херпес инфекция, и други) в материали като слюнка, остъргване на шийката на матката, пикочния канал, което е от местната фокуса. Въпреки това, ние не трябва да забравяме, че предаването на инфекцията от носители на здрави хора може, като преход към хронична форма на заболяването с процеса на активиране. Ако PCR е положителен в кръвта, след това не е носител, и изисква специфично лечение.

Количествен PCR се оценява от лекар индивидуално за конкретна инфекция отделно и няма общи градации. Въз основа на резултата от количествен PCR лекар може да определи нивото на активност на инфекция и изложи етап на заболяване, което е определено да повлияе на хода и предписаната доза лекарства.

Един от последните въпроси, предизвикващи загриженост: как точно PCR диагностика?

3 има определение за PCR анализ:

1. Точност (с голяма вероятност може да идентифицира или липса на инфекция).
2. специфичност (точност на откриване на специално инфекция).
3. чувствителност (дори при ниски нива на патогени генетичен материал в пробата се детектира инфекция).

Полимеразна верижна реакция е почти не дава неверни положителни (т.е., няма положителни проби, при което инфекцията е отсъства). Грешните отрицателни резултати са редки (най-често това се дължи на липсата на активна инфекция при хората в момента). Например, латентна инфекция, хронична инфекция е активен.