Свързан имуносорбентен анализ (ELISA)

Свързан имуносорбентен анализ (ELISA)

В момента ELISA се използва при следните случаи:

1) Търсене на специфични антитела и да е инфекция zabolevaniyu-
2) търси за антигените на всички заболявания (инфекциозни заболявания, венерически) -
3) изследване на хормоналния статус patsienta-
4) скриниране за onkomarkery-
5) тестване за наличие на автоимунни заболявания.

Предимства на ELISA:

1) с висока специфичност и чувствителност на ELISA (над 90%).
2) способността да се определи и наблюдава динамиката на болестни процеси, т.е. сравняване на количеството на антитела в различни интервали от време.
3) диагностични наличност ELISA по всяко лечебно заведение.

Относителната липса на:

1) за откриване на имунен отговор (антитела), но не на патогена.

основни понятия

Преди да се изясни същността на метода ELISA, за кратко е разбирам някои понятия.
Антителата (или имуноглобулини - Ig) - специфични протеини, продуцирани от В -
лимфоцити (имунни клетки) в отговор на влизането в тялото на инфекциозен патоген (вирус, бактерии, гъбички и т.н.). Отделят имуноглобулин А (IgA), имуноглобулин Е (IgE), имуноглобулин М (IgM), имуноглобулин G (IgG), имуноглобулин D (IgD). Те се различават един от друг и образуват молекулна маса полуживот участие / неучастие в инфекциозни процеси, откриване на времето от момента на инфекцията. Ако говорим за молекулно тегло, най-той е IgM - е пентамер (950,000 Da), за разлика от останалата част от Ig (150-200 000 Da), така IgM просто не могат да преминават през плацентарната бариера. Затова откриването на IgM при дете на 1 година живот винаги е признак на инфекция при плода. По-голямата част на серумните имуноглобулини е представена IgG (75-85%), а най-ниската - IgE (0003%). Инфекциозният процеса участва пряко като само IgA, М, G. IgE са признак на алергични реакции и условия, и IgD - може да бъде открит само в лимфните възли и сливиците тъкан, играе роля в образуването на местния имунитет.

класа имуноглобулини

антигени - високо молекулно тегло органични вещества, по-специално инфекциозни патогени и други заболявания, както и различни вещества модифицирани клетки, получени в дадена болест (автоимунно заболяване, рак).

имунни комплекси - антиген-антитяло, участващи в имунния процес.

На това, което е метода на ELISA.

Има няколко разновидности на ELISA (преки, косвени, блокиращи метод Конкуренти), но на практика най-често използваната хетерогенен имуноензимен или ELISA (ензим свързан имуносорбентен анализ)

В основата на имуноанализа на имунния отговор на антиген и антитяло, за да се образува имунен комплекс: антиген-антитяло, което води до промяна на ензимната активност на специфични марка върху повърхността на антитяло.

Същността на метода ELISA

По-просто казано, този процес може да бъде разделен на няколко етапа:

1) На повърхността на плочата за лекар дупки, проверяващият е пречистен антиген специфичен патоген. При добавяне на биологичен материал (кръв серум) на пациент специфична реакция настъпва между антигена и желаното антитяло (имуноглобулин). Тази връзка ще действа като "специален антиген" в следващия етап.

2) В този етап е IR за образуване на (имунни комплекси) - реакцията между "специфичен антиген" и конюгат (това имуноглобулин белязано с пероксидаза ензим). Добавен специален хромоген. В резултат на тази ензимна реакция е образуването на оцветени вещества в ямките на плаката, интензивността на цвета на които зависи от броя на имуноглобулини пациента (антитела), съдържащи се в материала.

3) освен това има Тълкуване: фотометрия с помощта на многоканална спектрофотометър сравняване на оптичната плътност на изпитвания материал с оптична плътност от контролни проби, математически резултати обработка. Количеството на антитялото в пациента, зависи от височината на оптичната плътност на ямките.

Обикновено в практиката, използването на 96-ямкови плаки.

При измерване на оптичната плътност (OD) течен обем изчислява проба (или концентрация) специфични антитела в единица обем. След това резултатът се сравнява с контролна проба.

Трябва да се помни:за всеки тест система, разработена, за да се вземат предвид резултатите индивидуалното изпълнение на стандартите за ефективност и патология (т.е. "референтна стойност"). Това трябва да се има предвид при оценяването на резултатите от всеки казус. Правилно интерпретира резултатите от лаборатория "референтни стойности" друга лаборатория. Неправилно е да се сравняват резултатите от различни лаборатории заедно.

При определяне на ELISA реакции и има стойност като концепция като ненаситеност антитяло.
авидитивни антитела - якост на връзка на антитяло към антиген и количеството на антигена намира в съотношение с immnoglobulinami (антитела). Ненаситеността е от голямо значение при оценката на предполагаемо заразяване на срока, който е изключително важен при диагностицирането на първичната инфекция при бременни жени.

Основа тестово антитяло ненаситеност включва лечение на имунен комплекс (антиген-антитяло) урея разтвор, за да се унищожи протеин. Vysokoavidnye връзки остават непокътнати, както и ниската склонност, унищожен. Резултатът се дава като индекса на авидитет, изразен като процент (%).

Какви заболявания се откриват чрез ELISA-диагностика?

1. Инфекциозни заболявания
1.1 Вирусен хепатит A (IgM, G), B антигени -HBsAg, HBeAg, антитяло - IgM HBcorAg, Ig общо HBcorAg, IgG HBeAg), C (антитяло Ig М, G HCV), D (IgM, G), Е (Ig М, G) и други.
1.2 HIV инфекция (IgG)
1.3 цитомегаловирусна инфекция (антитела IgM, G)
1.4 Epstein-Barr инфекция или mononkleoz (IgM антитяло, G на ЕА, VCA, Na вирусни протеини)
1.5 херпесна инфекция (IgM антитяло, G)
1.6 Токсоплазмоза (IgM антитяло, G)
1.7 рубеола (IgM, G)
1.8 морбили (IgM, G), бруцелоза (IgM, G), Pseudotuberculosis (IgM, G), салмонелоза (IgM, G), шигелоза или дизентерия (IgM, G), аспергилоза (IgM, G), енцефалит от кърлежи, борелиоза и много други.
1.9 паразитози (ламблиаза, токсокариаза, трихиноза, opistorhoz, ехинококозата, alveococcosis и други), в която открива IgG
1.10 STD (полово предавани болести чрез) - микоплазмоза (IgM, G), Ureaplasmosis (IgM, G), Chlamydia (IgA, М, G), сифилис (IgG)
1.11 Helicobacter инфекции (IgG)

2. Маркери на автоимунни заболявания и показателите за човешката имунна система (Общо IgE, общия IgG, IgA общо, общ IgM, IgD общо, секреторен IgA, IgG 2, IgG4, CRC циркулиращи имунни комплекси, IgA и IgG антитела към глиадин и други)

3. Onkologichsekie маркери (TNF - тумор некрозисфактор, СЕА - карциноембрионен антиген, PSA - специфичен за простатата антиген, ЧХГ - човешки хорион гонадотропин, СА 125, alveomutsin и много други)

4. репродуктивни нарушенияI (естрадиол, прогестерон, пролактин, тестостерон, АФП AFP-, FSH - фоликулостимулиращ хормон и други)

5. заболяване на щитовидната жлеза (Свободна и свързания Т3, Т4, тироглобулин, щитовидната жлеза пероксидаза - ТРО, тироид-стимулиращ хормон - TTG).

Този списък е далеч не всички болести са диагностицирани с ELISA.

Материалът за ELISA анализ и управление ограда му

Най-честият материал за реакцията на IFA - серум на пациента, се приема на празен стомах. Материалът може да служи като гръбначно-мозъчната течност, амниотична течност, стъкловидното тяло съдържание, слуз на цервикалния канал и уретрални тампони.

Подготовка пациенти за доставка на материали за IFA

Кръвта се приема на празен стомах. Преди доставката на кръв не е нужно да се вземат каквито и да било лекарства. Специфично лечение (антибактериални, антивирусни, антипаразитно, и т.н.) трябва да се спре най-малко 2 седмици преди изследването.

IFA гледна точка на производството

Имуносорбент анализ материал се проведе бързо през деня. Забавянето може да бъде в различни лаборатории поради натрупване на определено количество от серумите.

Възможни резултати от ELISA диагностика

При оценяването на резултатите от специфични инфекции е важен клас от антитела, идентифицирани и техния брой. Това засяга не само въпроса за етиологията на инфекция (т.е. или не), но очакваната стадия на заболяването (остра и хронична), както и наличието на активна инфекция (остра или обостряне на хроничен) по време на проучването.

Какви са приблизително времето на антитела (имуноглобулини - Ig)?

Най-ранните IgM антителата са. Те могат да се идентифицират чрез 1-3 седмици след възможни инфекции, които характеризират острата фаза на инфекцията. Втората ситуация е появата на IgM антитела - активиране (или изостряне) хроничен процес. IgM антитела циркулират средно около 3 месеца, след това броят им постепенно се преодолява. Въпреки това, при някои пациенти, следи от IgM могат да бъдат открити в рамките на 1-2 години след инфекцията.

Съвременните системи за изпитване са силно чувствителни, така че там са неспецифични фалшиво положителни резултати (често при бременни жени). Ето защо, положителен IgM при тази група пациенти, трябва да се провери отново!

IgA антитела се появяват 2-4 седмици след заразяването, но в количество, достатъчно да се открие - един месец. Серум IgA синтезира от плазмени клетки на далака, лимфните възли и мукозни секреторни IgA концентрират върху лигавиците да изпълнява защитна функция - участва в местна имунитет.

На 4-тия седмици след инфекцията започнат да се появяват IgG антитела. В повечето инфекции титър постепенно се увеличава, с максимално по различно време (средно с 1,5-2 месеца), а след това на тигъра остава на ниско ниво и показва имунитет. В някои заболявания (микоплазмоза, хламидия, трихомониаза) ниво IgG не е висока, е значително намалена поради липса на имунитет в тези инфекции.

Варианти за откриване на антитела от различни класове:

- Изолиран откриване IgM антитяло предполага наличието на първичен
инфекция.
- Едновременно откриване на кръв IgM и IgG типичен за първична инфекция
През последните 2-3 месеца, както и изостряне на хронични заболявания. Поради това, наличието на IgM по време на бременност не винаги е индикация за първият случай на зараза.
- Откриване на IgG изолиран и може да се отбележи на имунитет към болестта,
и хронична инфекция. Във второто положение е разположен и количеството на антитяло (титър) и промяната в динамиката на титъра. Обикновено изследвания бяха проведени с интервал от 2-4-6 седмици.
- Откриване на IgA или IgM изолира показва основната инфекция. при
заедно с появата на IgA IgG приема активиране на хронична инфекция (средно 2 седмици от времето на обостряне).

дефиниция авидитет IgG антитяло е идеалното допълнение към диагнозата на началния етап на инфекцията инфекцията дългогодишния че има клинично значение, особено при оценката на риска от за вътрематочна инфекция на плода. Откриването на ниска склонност, IgG показва първичната инфекция и определя средната стойност след 4-6 месеца след заразяването, рядко по-дълго. Нисък авидитет IgG изискват други лабораторни данни от първична инфекция (IgM). Висок авидитет антитела са или знак на хронични заболявания и остро или образува имунитет.

Особено при бебета:при деца под една година, а понякога дори и на 1,5 години в кръвта циркулира майчина IgG антитела към различни инфекции (т.е., не е на проникването им през плацентата от майката на плода в утробата). Това не е само по себе си е знак за наличието на инфекция в настоящето. Ако на възраст от takjm открива IgM (Припомняме, че майката IgM преминават през плацентата не може), тя е знак за инфекция или вътрематочна инфекция, придобити след раждането.

Количествен метод ELISA

Резултати ELISA диагностика (чрез имуноензимен анализатор) се издава в определени единици:
- Оптичната плътност (OD) на пробата - концентрацията на специфично антитяло за единица обем. Колкото по-висока OD на пробата, толкова по-висока концентрация на антитела. Някои резултати предполагат фактор позитивност (СР) - е оптичната плътност на пробата.
- Брой на концентрация на антитяло (нг / мл или нг / мл).
- В серумен титър: 1:20, 1:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 и така нататък. Диагностични титри (в която е поставена диагноза на заболяването, отколкото факта на инфекция) за различни заболявания.
- Под формата на символи - "+", "-" (+, ++, +++, ++++) "?".
- В качествена оценка на стойност критерий (положителен или отрицателен).

Правилно се изчисли количеството на антитяло вариантни имуноглобулини за идентификация клас, и, следователно, се излага на стадия на заболяването и необходимостта от само лекар може да лекува.

Не трябва да забравяме, че тяхната "референтна стойност" (изпълнения норма), и по-горе, което определено диагностицирано заболяване (варианти патология), разработена за всеки тест на системата. "референтни стойности" за различни тестови системи различни.

Правилния сравняване на резултатите ELISA, взето с течение на времето, е възможно само в случай на тяхното производство в същата лаборатория.